ข้อมูล

กล้องจุลทรรศน์ FoldScope เหมาะสำหรับเซลล์พันธุศาสตร์พืชหรือไม่?

กล้องจุลทรรศน์ FoldScope เหมาะสำหรับเซลล์พันธุศาสตร์พืชหรือไม่?



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

เมื่อเร็วๆ นี้ ฉันเริ่มสนใจพฤกษศาสตร์สมัครเล่นมากขึ้น และมีพื้นฐานด้านพันธุศาสตร์และจีโนม (PhD+) ฉันเคยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงและแบบคอนโฟคอลแบบมาตรฐาน แต่ไม่มีความชำนาญด้านกล้องจุลทรรศน์มากนัก

ฉันมักพบว่าตัวเองกำลังสงสัยว่าพืชชนิดหนึ่งที่ฉันกำลังดูอยู่นั้นเป็นอย่างไร เพราะฉันรู้ว่านี่เป็นลักษณะสำคัญของประวัติชีวิตและความแปรปรวนทางพันธุกรรมในพืชป่า

ฉันสงสัยว่าขอบเขตเล็กๆ น้อยๆ ราคาถูก เช่น โฟลด์สโคปจะเป็นเครื่องมือกล้องจุลทรรศน์ที่เพียงพอสำหรับการดูเซลล์พันธุศาสตร์ของตัวอย่างพืช (น่าจะค่อนข้างเตรียมการอย่างคร่าวๆ) หรือไม่ โดยสมมติว่าฉันสามารถใช้โปรโตคอลที่บ้านที่เหมาะสมได้ (ขณะนี้ฉันไม่สามารถเข้าถึงพื้นที่แล็บได้)

ฉันพบคำถามนี้แล้ว แต่มันไม่ได้อธิบายอะไรมากเกี่ยวกับพารามิเตอร์ที่จำเป็นสำหรับกล้องจุลทรรศน์เซลล์สืบพันธุ์

ดังนั้น:

1) พารามิเตอร์กล้องจุลทรรศน์ใดบ้างที่จำเป็นต้องได้รับการตอบสนองเพื่อทำไซโตเจเนติกส์?

2) foldscope ตรงกับพวกเขาหรือไม่?

3) ถ้าไม่ใช่โฟลด์สโคป แล้ว Cheapo scope ตัวไหนอีกบ้างที่จะใช้งานได้?


ระบบคาริโอไทป์สากลสำหรับ hexaploid และ diploid อเวนา สายพันธุ์นำเซลล์โอ๊ตมาสู่ยุคจีโนม

การระบุโครโมโซมระหว่าง อเวนา สปีชีส์ได้รับการศึกษาโดย C-banding และ ในที่เกิดเหตุ การผสมพันธุ์ อย่างไรก็ตาม ผลลัพธ์ที่ซับซ้อนจากระบบการตั้งชื่อของเซลล์สืบพันธุ์เพื่อระบุโครโมโซมของข้าวโอ๊ตมักจะขัดแย้งกัน ระบบการตั้งชื่อคาริโอไทป์สากลสำหรับการระบุโครโมโซมที่แม่นยำและการศึกษาวิวัฒนาการเปรียบเทียบจะมีความจำเป็นสำหรับสกุล อเวนา ขึ้นอยู่กับลำดับจีโนมที่เพิ่งเปิดตัวของ hexaploid และ diploid อเวนา สายพันธุ์.

ผลลัพธ์

มีการทำนายลำดับซ้ำซ้อนและตั้งอยู่ทางกายภาพบนบริเวณโครโมโซมของการปลดปล่อย Avena sativa OT3098 การประกอบจีโนม v1. โพรบโอลิโกนิวคลีโอไทด์ (โอลิโก) ใหม่แปดตัวสำหรับการเรืองแสงตามลำดับ ในที่เกิดเหตุ การผสมพันธุ์ (FISH) ได้รับการออกแบบและนำไปใช้กับโครโมโซมคาริโอไทป์บนการแพร่กระจายของไมโทติคเมตาเฟสของ A. brevis, อ. นุดา, ก. wiestii, A. ventricosa, ก. ฟาตัว, และ ก. sativa สายพันธุ์. เราสร้างคาริโอไทป์มาตรฐานความละเอียดสูงของ ก. sativa ขึ้นอยู่กับสัญญาณ FISH ที่แตกต่างกันของโพรบโอลิโกหลายตัว การวาดภาพปลาด้วยโอลิโกสแบบเทกอง ตามบริเวณคอลลิเนียร์ข้าวสาลี-ข้าวบาร์เลย์ ถูกใช้เพื่อตรวจสอบการกำหนดกลุ่มเชื่อมโยงสำหรับแต่ละบุคคล ก. sativa โครโมโซม เราได้รวมระบบคาริโอไทป์ที่ใช้ Oligo-FISH ใหม่เข้ากับระบบการตั้งชื่อคาริโอไทป์ก่อนหน้าโดยใช้แถบ C-banding และวิธี FISH ตามลำดับ จากนั้นจึงกำหนดจุดแตกหักที่แม่นยำของการโยกย้ายโครโมโซมบางส่วนใน ก. sativa.

บทสรุป

ระบบระบุโครโมโซมสากลใหม่นี้จะเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในการอธิบายความหลากหลายทางพันธุกรรม การจัดเรียงโครโมโซมใหม่ และความสัมพันธ์เชิงวิวัฒนาการระหว่าง อเวนา สปีชีส์โดยวิธีเปรียบเทียบทางเซลล์สืบพันธุ์และจีโนม


มาลาเรียเป็นหนึ่งในนักฆ่าเด็กที่แย่ที่สุดในโลก โดยมีเด็กหนึ่งคนเสียชีวิตจากโรคนี้ทุกๆ นาที เด็ก 1,300 คนต่อวันหรือเกือบ 500,000 คนต่อปี สิ่งที่แย่กว่านั้นคือมีรายงานผู้ป่วยโรคมาลาเรียมากกว่า 200 ล้านรายในปี 2555 โดยส่วนใหญ่เป็นผู้หญิงและเด็กที่ป่วย มาลาเรียมักเกิดขึ้นในพื้นที่ที่เศรษฐกิจด้อยพัฒนาด้วยโรคที่ทำให้เด็กต้องออกจากโรงเรียนมากกว่าโรคอื่นๆ เด็กที่เป็นโรคมาลาเรียมักมีความบกพร่องทางการเรียนรู้ที่ยั่งยืนไปสู่วัยผู้ใหญ่

มะเร็งทำให้เสียชีวิตได้เกือบ 7 ล้านคนต่อปีทั่วโลก และเชื่อว่า 1.5 ล้านคนเสียชีวิตเหล่านี้สามารถป้องกันได้ในแต่ละปีด้วยกลยุทธ์การรักษาที่ดีกว่า

สิ่งประดิษฐ์ของ Prakash ช่วยให้สามารถวินิจฉัยชนิดของมาลาเรียในผู้ป่วยได้ทันทีและแม่นยำ เพื่อให้สามารถให้ยาที่มีประสิทธิภาพสูงสุดได้ กล้องจุลทรรศน์ 50 เซ็นต์มีความทนทานและสามารถทนต่อการใช้งานในทางที่ผิดได้เล็กน้อย อย่างไรก็ตาม ในความคิดของเขา หากใช้กล้องจุลทรรศน์เพียงครั้งเดียว มันก็คุ้มค่ามากกว่าสำหรับตัวมันเอง

บทความที่เกี่ยวข้องเกี่ยวกับ IndustryTap:

เดวิดสนุกกับการเขียนเกี่ยวกับเทคโนโลยีชั้นสูงและศักยภาพในการทำให้ชีวิตดีขึ้นสำหรับทุกคนที่อาศัยอยู่ในโลก


สินค้าแนะนำ

สื่อสำหรับการวินิจฉัยก่อนคลอด

ส่วน

BIO-AMF™-2 สำหรับการเจริญเติบโตของ Amniocyte อย่างรวดเร็ว

BIO-AMF™-2 เป็นอาหารพร้อมใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงเบื้องต้นของน้ำคร่ำของมนุษย์และเซลล์คอริออนิกวิลลัส สื่อนี้เหมาะสำหรับทั้งระบบเปิด (5% CO2) และระบบปิด BIO-AMF™-2 ประกอบด้วย FBS, L-glutamine และ gentamycin และได้รับการปรับให้เหมาะสม สำหรับคาริโอไทป์ที่รวดเร็วเป็นพิเศษ ในการใช้งานตามปกติ

ข้อดีโดยย่อ:

  • จัดการง่าย (สื่อหนึ่งองค์ประกอบพร้อมใช้งาน)
  • อัตราการเติบโตที่รวดเร็วและศักยภาพสูง
  • ลดเวลาคาริโอไทป์ (8 วัน)
  • ดัชนีไมโทติคสูงและผลผลิตเมตาเฟสที่ดี
  • ผลิตภายใต้cGMP

BIO-AMF™-2 ผลิตขึ้นตามมาตรฐาน cGMP โรงงานผลิตในเมือง Beit Haemek ประเทศอิสราเอล ได้รับการจดทะเบียนโดย FDA และได้รับการรับรองตามมาตรฐาน ISO 13485 นอกจากนี้ แต่ละชุดยังผ่านการทดสอบความปลอดเชื้อ ค่า pH ออสโมลาลิตี และเอนโดทอกซินอีกด้วย

สามารถจองเป็นชุดได้ หากต้องการบันทึกการตรวจสอบความถูกต้องของแบทช์แต่ละรายการที่อาจจำเป็น คุณสามารถจองชุดงานได้สูงสุด 300 x 100 มล. แต่ละชุดมีอายุการเก็บรักษา 24 เดือน อย่าลังเลที่จะขอตัวอย่างจากเรา คุณภาพจะโน้มน้าวใจคุณอย่างแน่นอน!

สำหรับตัวอย่างที่ยากและผลผลิตเมตาเฟสที่สูงขึ้น เราขอแนะนำ BIOAMF™-3

มาตรา 2

BIO-AMF™-3 สำหรับผลผลิตเมตาเฟสที่สูงขึ้น

ชอบ BIO-AMF™-2, BIO-AMF™-3 เป็นอาหารพร้อมใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงเบื้องต้นของน้ำคร่ำของมนุษย์และเซลล์คอริออนิกวิลลัส สื่อนี้ยังเหมาะสำหรับการเปิด (5% CO2) และสำหรับระบบปิด อย่างไรก็ตามไม่เหมือน BIO-AMF™-2, BIO-AMF™-3 ได้รับการปรับให้เหมาะสมสำหรับผลผลิตเมตาเฟสที่มากขึ้น และดังนั้นจึงเหมาะสำหรับตัวอย่างที่ยาก

สื่อสำหรับการวินิจฉัยหลังคลอด

มาตรา 3

สื่อคาริโอไทป์ BIO-HEMATO™ สำหรับเซลล์เม็ดเลือด

ไบโอ-ฮีมาโต™ เป็นตัวเลือกแรกสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์เม็ดเลือดในระยะสั้น (ไม่มีลิมโฟไซต์!) จากไขกระดูกและเลือดส่วนปลาย เหมาะสมที่สุดสำหรับตัวอย่างที่มีจำนวนเซลล์ต่ำหรือดัชนีไมโทติคต่ำ ด้วยสื่อปรับอากาศ

มาตรา 4

BIO-MARROW™ Karyotyping Medium สำหรับเซลล์ไขกระดูก

BIO-MARROW™ เป็นสื่อพิเศษสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ไขกระดูกขั้นต้นในระยะสั้น ไม่มีสื่อปรับอากาศ

ส่วนเนื้อหา

สื่อ Karyotyping BIO-PB™ สำหรับเซลล์เม็ดเลือดส่วนปลาย

BIO-PB™ เป็นสื่อพิเศษสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ลิมโฟไซต์ในระยะสั้นจากเลือดส่วนปลาย มีจำหน่ายเป็น BIO-PB™ ด้วยไฟโตฮีแมกกลูตินินและ BIO-PB™ ปราศจากไฟโตฮีแมกกลูตินิน

การควบคุมวัฏจักรเซลล์และคาริโอไทป์

ในการสร้างคาริโอแกรม (การแสดงภาพของโครโมโซมทั้งหมดในเซลล์ตามลำดับ) เซลล์จะถูกเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อจนกว่าจะถึงเมตาเฟส จากนั้นโครโมโซมเมตาเฟสจะถูกแยกออกจากสไลด์แก้ว การใช้ซอฟต์แวร์ประมวลผลภาพ โครโมโซมจะถูกจัดเรียงตามขนาด พื้นที่เซนโทรเมียร์ และรูปแบบแถบ สิ่งนี้ทำให้สามารถเปลี่ยนแปลงจำนวนและโครงสร้างของโครโมโซมได้ ซึ่งเรียกว่าความคลาดเคลื่อนของโครโมโซมเชิงตัวเลขหรือเชิงโครงสร้าง

เวิร์กโฟลว์ทั่วไปมีลักษณะดังนี้:

เซลล์ของผู้ป่วย (เช่น ลิมโฟไซต์ แอมนิโอไซต์ เซลล์คอริออนิก วิลลัส) ได้รับอนุญาตให้เติบโตในตัวกลางที่กระตุ้นการแบ่งตัวของเซลล์ (มักใช้ไฟโตเฮมักกลูตินิน) หลังจากเวลาที่กำหนด – เซลล์ควรอยู่ในเมตาเฟส – การแบ่งเซลล์ถูกขัดจังหวะโดยการเพิ่มตัวยับยั้งไมโทติค (เช่น โคลเซมิด พิษของดอกส้มในฤดูใบไม้ร่วง) เซลล์ถูกหมุนเหวี่ยง สารเหนือตะกอนของสื่อถูกทิ้ง และตะกอนของเซลล์ที่เหลือจะถูกรวบรวมในสารละลายโพแทสเซียมคลอไรด์ 0.075 โมลาร์ไฮโปโทนิก

สภาวะไฮโปโทนิกจะขยายเซลล์และทำให้เซลล์แตกได้ง่ายขึ้นเมื่อติดตั้งเซลล์บนสไลด์ เซลล์ในเมตาเฟสไม่มีเยื่อหุ้มนิวเคลียส ดังนั้นโครโมโซมจึงถูกปล่อยลงบนสไลด์โดยตรง โครโมโซมเมตาเฟสมีการควบแน่นสูงและสามารถตรวจสอบได้โดยง่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง – โดยเฉพาะอย่างยิ่งหากได้รับการย้อมสีเพิ่มเติม (Giemsa-banding, FISH)

Cell Synchronization Kit สำหรับคาริโอแกรมที่มีความละเอียดสูง

NS ชุดประสานเซลล์ จาก Biological Industries ปรับปรุงจำนวนเซลล์ที่อยู่ในช่วงเก็บเกี่ยวที่สมบูรณ์แบบสำหรับการสร้างคาริโอไทป์ การซิงโครไนซ์ตาม MTX ของแต่ละรอบเซลล์สามารถเพิ่มจำนวนโครโมโซมของโพรเมตาเฟสได้อย่างมีนัยสำคัญ หลังจาก G-banding โครโมโซมเหล่านี้แสดงความละเอียดของแถบที่ดีเยี่ยม ซึ่งไม่สามารถทำได้ในการวิเคราะห์ตามปกติ ชุดอุปกรณ์นี้ได้รับการออกแบบมาโดยเฉพาะสำหรับการวิเคราะห์ทางไซโตเจเนติกที่มีความละเอียดสูง

NS ชุดประสานเซลล์ มีสารละลายพร้อมใช้ของ methotrexate (MTX) และ thymidine


บริการ

เรามีชุดเครื่องมือไมโครสโคปมากมาย เช่น กล้องจุลทรรศน์ไวด์ฟิลด์ ไมโครสโคปศูนย์บ่มเพาะ เครื่องสแกนสไลด์ดิจิตอล เครื่องอ่านเนื้อหาสูง กล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอล กล้องจุลทรรศน์ความละเอียดสูง และเทคโนโลยีไลท์ชีท

ทีมงานของเราสามารถให้คำปรึกษา ฝึกอบรม พัฒนา หรือให้ความช่วยเหลือแก่คุณได้

รูปภาพโดยเจ้าหน้าที่หลักของ Cellular Imaging

เราใช้งานเครื่องสแกนสองเครื่องและซอฟต์แวร์เฉพาะสำหรับการถ่ายภาพและการวิเคราะห์เชิงปริมาณของเจล รอยเปื้อน และเพลต รวมถึงการใช้งานต่างๆ เช่น หยดเหนือ ใต้ และตะวันตก In-Cell Westerns และอื่นๆ

ทีมของเราให้การฝึกอบรมสำหรับผู้ใช้ครั้งแรกทั้งหมด เมื่อมีการร้องขอ ทีมงานของเราสามารถสแกนและวิเคราะห์จุดของคุณ

รูปภาพโดยเจ้าหน้าที่หลักของ Cellular Imaging

Karyotyping คือการวิเคราะห์โครโมโซมในเซลล์ โครโมโซมจะกำหนดจำนวนและลักษณะของโครโมโซมและตรวจจับความผิดปกติของโครโมโซม เช่น โครโมโซมที่หายไปหรือโครโมโซมพิเศษ (aneuploidies) รวมถึงความผิดปกติของโครโมโซมที่หลากหลาย (เช่น การลบและการโยกย้าย) เราให้บริการคาริโอไทป์แบบจำกัดสำหรับการวิจัยเท่านั้น ตัวอย่างเช่น เพื่อทดสอบสายเซลล์ เราคาริโอไทป์เซลล์มนุษย์และหนูเมาส์และอาจพิจารณาสปีชีส์อื่น

รูปภาพโดยเจ้าหน้าที่หลักของ Cellular Imaging


Foldscope – เมื่อศิลปะกระดาษกับวิทยาศาสตร์มาบรรจบกัน

ตามกฎแล้วกล้องจุลทรรศน์มีราคาแพงและเป็นเครื่องมือที่ละเอียดอ่อน แน่นอนว่าไม่ใช่ของเล่นที่เหมาะสำหรับเด็กอายุแปดขวบและอาจเป็นสิ่งสุดท้ายที่พ่อแม่จะนึกถึงการมอบให้กับลูก แล้วกล้องจุลทรรศน์ที่ทำจากกระดาษราคาประมาณ R40 ล่ะ? กล้องจุลทรรศน์ที่กันน้ำ ทนทาน และมีขนาดเล็กพอที่จะใส่ในกระเป๋าเสื้อหรือเสียบในหนังสือ? เข้าสู่ Foldscope ซึ่งเป็นอุปกรณ์นวัตกรรมใหม่ที่จะเปลี่ยนวิธีการสอนวิทยาศาสตร์ที่โรงเรียนและที่บ้าน

โรงเรียนส่วนใหญ่ในแอฟริกาใต้ไม่ได้โชคดีพอที่จะมีกล้องจุลทรรศน์เพียงตัวเดียว นับประสาหนึ่งชิ้นสำหรับเด็กแต่ละคน และเด็กส่วนใหญ่ไม่เคยมีโอกาสใช้กล้องจุลทรรศน์หรือสำรวจสิ่งที่ผู้ประดิษฐ์ Foldscope เรียกว่า "ไมโครคอสมอส" อย่างอิสระ เป็นความจริงที่เป็นที่ยอมรับว่าเด็กเรียนรู้ได้ดีที่สุดผ่านประสบการณ์มากกว่าการสอน และกิจกรรมภาคปฏิบัติเป็นส่วนสำคัญของการเรียนรู้จากประสบการณ์ การเรียนรู้จากประสบการณ์ยังช่วยกระตุ้นจินตนาการ กระตุ้นความอยากรู้อยากเห็น และหล่อเลี้ยงความรักในการเรียนรู้โดยทั่วไป เราจะคาดหวังให้ลูกๆ ของเราตื่นเต้นกับวิทยาศาสตร์ได้อย่างไรเมื่อไม่สามารถเข้าถึงวิทยาศาสตร์ได้ และโดยปกติแล้วการศึกษาของวิทยาศาสตร์จะเป็นแบบมิติเดียว

สาเหตุหนึ่งที่โรงเรียนในแอฟริกาใต้ทำผลงานได้ไม่ดีในด้านคณิตศาสตร์และวิทยาศาสตร์อย่างต่อเนื่องคือการขาดอุปกรณ์และวัสดุที่เหมาะสม ตอนนี้ลองนึกภาพว่าจะเกิดอะไรขึ้นถ้าเด็กทุกคนเข้าถึงกล้องจุลทรรศน์หรือดีกว่านั้นคือกล้องจุลทรรศน์ของตัวเอง ก่อนการประดิษฐ์ Foldscope นี่เป็นสิ่งที่เป็นไปไม่ได้สำหรับโรงเรียนส่วนใหญ่ของแอฟริกาใต้

แล้วกล้องจุลทรรศน์ที่บ้านล่ะ? ลองนึกภาพตัวเองสำรวจสวนกับลูกของคุณ เก็บดอกไม้หรือแมลง และศึกษาพวกมันโดยใช้กล้องพับ แม้แต่เรื่องง่ายๆ อย่างการตรวจสอบความแตกต่างระหว่างผลึกเกลือหรือน้ำตาลก็อาจเป็นกิจกรรมที่สนุกและให้ความรู้ สำหรับโฮมสคูล เครื่องมืออย่างโฟลด์สโคปเป็นสิ่งล้ำค่าในการยกระดับการศึกษาของพวกเขา ด้วยการจูงใจให้บุตรหลานของเราใช้เวลาและปฏิสัมพันธ์กับธรรมชาติ Foldscope ยังสามารถช่วยลดเวลาที่ใช้อยู่หน้าจอได้อีกด้วย

โฟลด์สโคปเริ่มต้นจากแผ่นกระดาษเคลือบพลาสติกแบนๆ ตัดเป็นรูปร่างที่พับและเสียบเข้าด้วยกันเพื่อสร้างกล้องจุลทรรศน์ที่ทำงานได้อย่างสมบูรณ์ กำลังขยายคล้ายกับกล้องจุลทรรศน์ที่พบในห้องเรียนและห้องปฏิบัติการวิจัย หมายความว่าสามารถขยายเซลล์พืชและสัตว์ ชิ้นส่วนของแมลง เช่น ปีกหรือตา ละอองเกสร เส้นผมและรูขุมขน จุลินทรีย์หลากหลายชนิด สาหร่าย เซลล์เม็ดเลือดแดง และตัวอ่อน รายการไม่มีที่สิ้นสุด ตราบใดที่ตัวอย่างสามารถใส่ลงในสไลด์ไมโครสโคปมาตรฐานได้ ก็สามารถดูได้ด้วยโฟลด์สโคป หนึ่งในคุณสมบัติที่น่าสนใจที่สุดคือความสามารถในการจับคู่กับกล้องบนโทรศัพท์มือถือหรือแท็บเล็ต สิ่งนี้ทำให้เด็กๆ มีโอกาสถ่ายภาพและวิดีโอและแบ่งปันสิ่งที่ค้นพบกับเพื่อน ผู้ปกครอง และครู การติด Foldscope เข้ากับแฟลชของโทรศัพท์มือถือทำให้สามารถฉายภาพลงบนหน้าจอได้ด้วย

ครูทั่วโลกเริ่มมองเห็นความเป็นไปได้อันยอดเยี่ยมในการทำให้เด็กๆ ตื่นเต้นกับวิทยาศาสตร์ ชีววิทยา และวิศวกรรมศาสตร์ ในสหรัฐอเมริกาและอินเดีย ปัจจุบันมีการใช้งานโฟลด์สโคปในห้องเรียนวิทยาศาสตร์เป็นประจำ โรงเรียนในแอฟริกาใต้ โดยเฉพาะโรงเรียนที่ขาดแคลนทรัพยากร อาจได้รับประโยชน์จากการมีอุปกรณ์เหล่านี้ในห้องเรียนอย่างแน่นอน ที่จริงแล้ว หากเราหวังว่าจะสามารถแข่งขันกับโลกทั้งใบในด้านวิทยาศาสตร์และคณิตศาสตร์ เครื่องมืออย่าง Foldscope ก็จำเป็น

Foldscopes มาในชุดอุปกรณ์พื้นฐาน 20 หรือ 100 ยูนิต เหมาะสำหรับใช้ในห้องเรียน เพื่อลดต้นทุน ชุดอุปกรณ์เหล่านี้ยังมาพร้อมกับอุปกรณ์เสริมจำนวนจำกัดที่จะแบ่งปันให้กับผู้เรียน การขายชุดอุปกรณ์ Deluxe แต่ละชุด รวมถึงชุดอุปกรณ์เสริมมากมายสำหรับใช้ในบ้าน ได้อุดหนุนชุดอุปกรณ์สำหรับห้องเรียนบางส่วน

SciBuddy ผู้เล่นใหม่ในสาขาสื่อการศึกษาทางวิทยาศาสตร์ เป็นผู้จัดจำหน่ายกล้องพับ Foldscopes แต่เพียงผู้เดียวในแอฟริกาใต้ เจ้าของ Arista Burke มีพื้นฐานด้านจุลชีววิทยาและการศึกษา และเชื่อว่า Foldscopes จะเป็นผู้พลิกโฉมโรงเรียนในแอฟริกาใต้ “นับเป็นครั้งแรกที่การให้เด็กทุกคนใน SA เข้าถึงกล้องจุลทรรศน์เป็นไปได้จริง โรงเรียนที่ตระหนักถึงศักยภาพของเครื่องมือนี้จะมีความได้เปรียบที่ชัดเจนในอนาคต” Arista กล่าว SciBuddy ต้องการให้ทุกโรงเรียนมีกล้องพับอย่างน้อยหนึ่งชุด เพื่อให้เป็นไปได้ พวกเขาบริจาคชุดอุปกรณ์หนึ่งชุดให้กับโรงเรียนด้อยโอกาสสำหรับทุกๆ 20 ชุดที่ขาย


กล้องจุลทรรศน์ FoldScope เหมาะสำหรับเซลล์พันธุศาสตร์พืชหรือไม่? - ชีววิทยา

ภาพหลักสูตรและวิทยาศาสตร์

แจ็ค เฮสลอป-แฮร์ริสัน
1920-1998

  1. สไลด์ที่ล้างด้วยกรดจากโปรโตคอล4
  2. แผ่นปิด 18 X 18 มม. (หมายเลข 1) (หมายเหตุ 5)
  3. ผ่าเข็มและคีมละเอียด
  1. 10x บัฟเฟอร์เอนไซม์: 40 มล. กรดซิตริก 100 mM + ไตรโซเดียมซิเตรต 100 มล. 60 มล. (สต็อก 10x ปรับเป็น pH4.8) เก็บสารละลายสต็อคไว้ที่ 4 ° C (สำหรับสารละลายที่มีความแข็งแรงในการทำงาน ให้เจือจาง 1:10 ในน้ำเพื่อใช้งาน)
  2. สารละลายเอนไซม์: 2% (w/v) เซลลูเลสจาก เชื้อราแอสเปอร์จิลลัสไนเจอร์ (Calbiochem, 21947, 4000 หน่วย/กรัมความเข้มข้นสุดท้าย: 80 หน่วย/มล.) หรือส่วนผสมของ Calbiochem 1.8% (72 หน่วย/มล.) และ 0.2% 'Onozuka' RS เซลลูเลส (5000 หน่วย/กรัม, ความเข้มข้นสุดท้าย 10 หน่วย/มล.) และ 3 % (v/v) เพกติเนสจาก เชื้อราแอสเปอร์จิลลัสไนเจอร์ (สารละลายในกลีเซอรอล 40%, Sigma P4716, 450 หน่วย/มล. ความเข้มข้นสุดท้าย 13.5 หน่วย/มล.) ทำขึ้นใน 1x เอนไซม์บัฟเฟอร์ เก็บใน aliquots ที่ 20 °C (หมายเหตุ 1, 2, 3)
  3. กรดอะซิติก 45% และ 60%: เจือจางกรดอะซิติกน้ำแข็งด้วยน้ำกลั่นให้ได้ความเข้มข้นที่เหมาะสม
  4. น้ำแข็งแห้งหรือไนโตรเจนเหลว

วัสดุ
แก้ไขราก ตา หรือวัสดุอื่นๆ จาก Protocol


การวินิจฉัยโรค Aplastic Anemiaa ที่ได้มา

ไซโตจีเนติก

ความผิดปกติของเซลล์พันธุกรรมสามารถเกิดขึ้นได้มากถึง 12-15% ของผู้ป่วย AA ทั่วไป ดังนั้น การตรวจสอบทางเซลล์พันธุกรรมควรดำเนินการอย่างเป็นระบบในผู้ป่วย AA ทุกราย [11] เนื่องจากไขกระดูก hypocellular มักเกิดขึ้นว่ามี metaphase ไม่เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์ที่เพียงพอ ในกรณีดังกล่าว ควรพิจารณา FISH ที่กำหนดเป้าหมายความผิดปกติเฉพาะ ความผิดปกติที่พบบ่อยที่สุดใน AA ได้แก่ trisomy 8, ความผิดปกติของ 6p (6pUPD) [12] , 5q- ความผิดปกติของโครโมโซม 7 และ 13 สำเนาพันธุ์ของเซลล์สืบพันธุ์ผิดปกติมักมีขนาดเล็กในการวินิจฉัย และอาจเกิดขึ้นระหว่างการเกิดโรคหรือ อาจเกิดขึ้นชั่วคราวและหายไปหลังจากการกดภูมิคุ้มกัน (IST) [13,14] ในขณะที่ความผิดปกติของโครโมโซม 7 และ 5 แม้จะไม่มี dysplasia ทำให้การวินิจฉัยมีแนวโน้มใน MDS มากขึ้น การค้นพบทางไซโตเจเนติกอื่นๆ ก็จัดหมวดหมู่ได้น้อยกว่า อย่างไรก็ตาม สำเนาพันธุ์ของเซลล์สืบพันธุ์ที่ผิดปกติไม่ได้หมายความถึงการวินิจฉัยของ MDS หรือ AML Del(13q) ได้รับการรายงานในผู้ป่วย MDS และกรณีมะเร็งทางโลหิตวิทยาอื่น ๆ [15] เช่นเดียวกับในผู้ป่วยที่มีกลุ่มอาการไขกระดูกล้มเหลว ผู้ป่วยที่นำเสนอด้วย del (13q) ส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองที่ดีต่อ IST [16,17] การเปลี่ยนแปลงไปเป็น MDS และ AML อาจเกิดขึ้นโดยปกติเป็นเวลาหลายเดือนถึงหลายปีหลังจากการวินิจฉัย AA ดังนั้นจึงแนะนำให้มีการเฝ้าติดตามเซลล์ระหว่างการติดตามผล


ตารางการตรึง คราบ และการย้อมสี

สารเคมีจำนวนมาก เช่น เอทิลแอลกอฮอล์ ฟอร์มาลิน กรดอะซิติก คลอโรฟอร์ม เมอร์คิวริก คลอไรด์ กรดโครมิก กรดพิกริก กรดออสมิก ฯลฯ ถูกใช้เดี่ยวหรือรวมกันเป็นตัวตรึงสำหรับการศึกษาทางกายวิภาค (สำหรับหลักการตรึง — ดู เซลล์วิทยา ส่วน). ในบรรดาสิ่งเหล่านี้ ฟอร์มาลินและฟอร์มาลิน-อะซิโต-แอลกอฮอล์ (FAA) มักใช้ในกายวิภาคศาสตร์

ใช้สารละลายน้ำ 5% ถึง 10% ของฟอร์มาลินเชิงพาณิชย์ (ความเข้มข้น 35% ถึง 40%) สำหรับการตรึง สำหรับทำสารละลาย 5% คอม 5 มล. ฟอร์มาลินถูกนำมาและ dist. เติมน้ำให้ได้ปริมาตร 100 มล. (Plant Micro-technique by Johansen)

ตามกฎแล้วฟอร์มาลินจะแทรกซึมช้าและเป็นหนึ่งในสารชุบแข็งที่ดีที่สุด เป็นตัวรีดิวซ์ที่ทรงพลัง ไม่ตกตะกอนโปรตีนหรือทำให้ไม่ละลายในน้ำ ฟอร์มาลินไม่ทำลายไม่เก็บไขมัน แต่รักษาฟอสโฟลิปิดมากหรือน้อย

ฟอร์มาลิน-อะซิโต-แอลกอฮอล์:

สารตรึงนี้หรือที่เรียกกันทั่วไปว่า FAA เป็นตัวตรึงมาตรฐานสำหรับเนื้อเยื่อพืชสำหรับการศึกษาทางกายวิภาค

มีการเสนอรูปแบบต่าง ๆ มากมาย แต่สัดส่วนมาตรฐานคือ:

เอทิลแอลกอฮอล์ 70% (หรือ 50%) — 90 มล.

กรดอะซิติกน้ำแข็ง - 5 มล

ฟอร์มาลิน (40% ฟอร์มาลดีไฮด์เช่น comm. ฟอร์มาลิน) — 5 ml

กรดอะซิติกน้ำแข็ง - 5 มล

เปอร์เซ็นต์แอลกอฮอล์ที่ต่ำกว่าเหมาะสำหรับวัสดุที่ละเอียดอ่อน เช่น ไบรโอไฟต์ สำหรับวัสดุแข็งและเป็นไม้ ควรลดปริมาณกรดอะซิติกและเพิ่มปริมาณฟอร์มาลิน เช่น ใช้ส่วนผสมที่สอง เนื่องจากฟอร์มาลินแทรกซึมได้ช้ากว่า วัสดุอาจถูกทิ้งไว้ใน FAA เกือบจะไม่มีกำหนดโดยไม่มีความเสียหายใด ๆ ที่เห็นได้ชัดเจน

เวลาขั้นต่ำของการตรึงคือ 18 ชั่วโมง วัสดุที่จะแบ่งส่วนจะถูกลบออกด้วยคีมและล้างในน้ำไหล 1/2 ถึง 1 ชั่วโมงแล้วจัดการได้อย่างอิสระ นี่เป็นของเหลวที่มีฤทธิ์กัดกร่อน และหากสัมผัสกับผิวหนัง ควรล้างออกทันที

คราบ:

มีการใช้สีย้อมธรรมชาติและสีสังเคราะห์จำนวนมากเป็นคราบตามกายวิภาค เช่น ฮีมาทอกซิลิน บราซิลซิน เฮมาติน บิสมาร์ก บราวน์ อีโอซิน ไวโอเล็ต เจนเชียน ไวโอเลต สีเขียวอ่อน ซาฟรานิน ซูดาน IV เป็นต้น (สำหรับหลักการย้อมสี โปรดดูที่ ส่วนเซลล์วิทยา).

Hematoxylin เป็นโครโมเจนที่ได้จากแก่นของต้น Hematoxylin campechianum สารละลายสีย้อมเองไม่มีส่วนเกี่ยวข้องกับเนื้อเยื่อ เว้นแต่ว่าเหล็กหรืออะลูมิเนียมจะเป็นสารที่มีกลิ่นฉุน ผลของสีของฮีมาทอกซิลินขึ้นอยู่กับ pH ของตัวทำละลายและหลังการบำบัดของเนื้อเยื่อ

ในตัวกลางที่เป็นกรด สีจะเป็นสีแดง และในตัวกลางที่เป็นด่างจะเป็นสีน้ำเงิน คราบฮีมาทอกซิลินสามารถเตรียมได้ตามตารางเวลาต่างๆ เช่น ฮีมาทอกซิลินเหล็กของไฮเดนไฮน์, ฮีมาทอกซิลินของเดลาฟีด, ฮีมาทอกซิลินของเออร์ลีห์ ฯลฯ

ไฮเดนไฮน์ ฮีมาทอกซิลิน เหล็ก:

ใช้สารละลายฮีมาทอกซิลิน 0.5% ในน้ำกลั่น ในทางปฏิบัติ จะมีการเตรียมสารละลาย 10% ในเอทิลแอลกอฮอล์สัมบูรณ์แล้วเจือจางด้วยน้ำกลั่นเป็น 0.5% เมื่อจำเป็น สารละลายได้รับอนุญาตให้ยืนเป็นเวลาสองสามวันเพื่อทำให้สุก (เป็นฮีมาทีน) สารละลายยังอาจถูกทำให้สุกเร็วขึ้นตามวิธีการที่อธิบายไว้ภายใต้ฮีมาทอกซิลินของเออร์ลีห์ เมื่อสุก สารละลายจะได้สีแดงไวน์ที่เข้มข้น

สารละลายที่เสถียรยิ่งขึ้นสามารถทำได้โดยการเติมสารละลายเอทิลแอลกอฮอล์ 10% สัมบูรณ์ 5 มล. ลงในสารละลายเมทิลเชลโล 100 มล. น้ำกลั่น 50 มล. และน้ำประปา 50 มล. ที่มีสารประกอบแคลเซียมในสารละลาย

หากขณะเขย่า สารละลายไม่ได้สีแดงไวน์เข้มข้น ให้เติมโซเดียมไบคาร์บอเนตเล็กน้อยแล้วเขย่าอย่างแรง การทำให้สุกเกือบจะในทันทีและสามารถใช้สารละลายได้ในครั้งเดียว สารละลายนี้มีอายุการใช้งานยาวนานกว่าสารละลายที่เป็นน้ำธรรมดาและไม่ทำให้เสียที่อุณหภูมิกลางคืน

การย้อมสีฮีมาทอกซิลินต้องใช้การมอร์แดนติ้ง ซึ่งสามารถทำได้โดยเฟอร์ริก แอมโมเนียม ซัลเฟต (สารส้มจากเหล็ก) หรือเฟอริกคลอไรด์ สารละลาย 2 ถึง 5% ที่ใช้สำหรับการมอร์แดนท์ และสารละลาย 1 ถึง 3% สำหรับดิฟเฟอเรนเทียและไชชั่น

เอิร์ลลี่’s Hematoxylin:

นี้ใช้กันอย่างแพร่หลายกับ safranin บนเนื้อเยื่อที่เป็นไม้

จัดทำขึ้นด้วยวิธีต่อไปนี้:

น้ำกลั่น — 50 มล. น้ำแข็ง, กรดอะซิติก — 5 มล

เอทิลแอลกอฮอล์แอบโซลูท — 50 มล. ผลึกฮีมาทอกซิลิน — 1 กรัม

กลีเซอรีน ซี.พี. — อลูมิเนียมโพแทสเซียมซัลเฟต 50 มล. — มากเกินไป

เก็บสารละลายไว้ในที่มืดจนกลายเป็นสีแดงเข้ม มันอาจจะสุกหรือสุกใน 3 ถึง 4 ชั่วโมงโดยการสัมผัสโคมไฟปรอทควอทซ์ วางสารละลายลงในจานระเหยที่กว้างและตื้น โดยอยู่ห่างจากโคมไฟปรอทประมาณ 2 ฟุต (61 ซม.) คนให้เข้ากันบ่อยๆ ในระหว่างการสัมผัส

เดลาฟิลด์’s Hematoxylin:

ใช้ผสมกับซาฟรานินในการย้อมสีเนื้อเยื่อไม้ยืนต้น ในสารละลายแอมโมเนียมอะลูมิเนียมซัลเฟตในน้ำ 400 มล. ให้เติมสารละลาย 4 กรัมทีละหยดทีละหยด ของผลึก hematoxylin ในเอทิลแอลกอฮอล์ 95% 25 มล. ให้โดนแสงและอากาศเป็นเวลา 4 วัน

จากนั้นเติม G.P. 10 มล. กลีเซอรีนและเมทิลแอลกอฮอล์ 100 มล. ปล่อยให้สารละลายนี้อยู่เป็นเวลา 2 เดือน ตากอากาศจนสีเข้มเพียงพอ อีกวิธีหนึ่งคือให้สารละลายสัมผัสกับหลอดปรอทควอทซ์เป็นเวลา 2 ชั่วโมงตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

บิสมาร์ก บราวน์ Y:

นี่คือสีย้อมสังเคราะห์ ได้มาจากถ่านหินและอยู่ในกลุ่มเอโซ บิสมาร์กสีน้ำตาลเป็นสีย้อมพื้นฐาน ความสามารถในการละลายของมันคือ 1.36% ในน้ำและ 1.08% ในแอลกอฮอล์ ใช้สารละลาย 1% ในเอทิลแอลกอฮอล์ 70% ผนังเซลลูโลสและเมือกเป็นสีน้ำตาลสดใส คราบจะคงอยู่ถาวรและไม่ค่อยเกิดคราบมากเกินไป โดยทั่วไปจะใช้สำหรับเนื้อเยื่อพืชที่ค่อนข้างอ่อนโดยไม่มีลิกนิน เช่น ไบรโอไฟต์

Eosin สามารถใช้ได้ทั้งในรูปแบบสีน้ำเงินและสีเหลือง eosin สีเหลืองมักใช้บ่อยกว่า เป็นสีย้อมถ่านหินที่มีสภาพเป็นกรดและเป็นอนุพันธ์ของฟลูออรีน ความสามารถในการละลายน้ำ 44.2% และแอลกอฮอล์ 2.18% เป็นคราบไซโทพลาซึมที่มีคุณค่า แม้ว่านักพฤกษศาสตร์จะไม่ค่อยมีใครใช้ก็ตาม โดยปกติจะใช้สารละลายน้ำ 1%

เป็นสีย้อมถ่านหินที่มีสภาพเป็นกรดและอยู่ในกลุ่มไดอะมิโน-ไตรฟีนิลมีเทน ความสามารถในการละลายคือ 20.35% ในน้ำและ 0.82% ในแอลกอฮอล์ เป็นคราบที่ดีมากสำหรับผนังไซโตพลาสซึมและเซลลูโลส การย้อมสีเกิดขึ้นเร็วมาก โดยไม่คำนึงถึงตัวทำละลายจะใช้สารละลาย 0.2% ถึง 0.5%

โดยปกติสีย้อมจะละลายในแอลกอฮอล์ 90% หรือ 95% บางครั้งละลายในแอลกอฮอล์แน่นอนและเจือจางด้วยน้ำมันกานพลู ด้วยการผสมผสานสีเขียวอ่อนกับแอลกอฮอล์ซูดาน IV เนื้อเยื่อที่ถูกตัดออกและเนื้อเยื่อใต้ผิวหนังสามารถแยกความแตกต่างจากเนื้อเยื่อที่ถูกทำให้แข็งได้

เป็นสีย้อมถ่านหินซึ่งเป็นพื้นฐานในการทำปฏิกิริยาและอยู่ในกลุ่มอาซิน ความสามารถในการละลายของมันคือ 5.45% ในน้ำและ 2.41% ในแอลกอฮอล์ เป็นคราบที่สำคัญมากสำหรับนักพฤกษศาสตร์ มันคราบโครงสร้างที่เป็น lignified, suberized, cutinized และ chitinized เช่นเดียวกับ nucleoli, chromosomes และ centrosomes

มีสูตรต่างๆ มากมายสำหรับทำสารละลายซาฟรานิน แต่โดยทั่วไปแล้ว สารละลาย 1% ในแอลกอฮอล์ 50% นั้นดีเพียงพอสำหรับวัสดุจากพืชส่วนใหญ่ สารละลายที่เป็นน้ำ 1% สามารถใช้สำหรับการย้อมสีชั่วคราว และสำหรับสารละลายน้ำพิเศษนี้ safranin ก็มีให้เช่นกัน เพราะถึงแม้จะละลายได้ทั้งในน้ำและแอลกอฮอล์ แต่จะละลายในแอลกอฮอล์ได้ดีกว่าในน้ำ คราบอื่น ๆ จะกล่าวถึงและเมื่อจำเป็น

ข้อควรระวังในการย้อมสี:

1. ในขณะที่ทำการย้อมส่วนด้วยมือเปล่า ให้หยดน้ำยาที่จำเป็นสองสามหยดลงในลูกบาศก์การย้อมสีกระจกสำหรับนาฬิกา) และหลังจากย้ายส่วนแล้ว ให้ปิดกระจกนาฬิกาอื่นไว้เสมอ

2. ย้ายส่วนจากน้ำยาหนึ่งไปยังอีกตัวหนึ่งด้วยไม้พายยกส่วนหรือมีดผ่าตัด ไม่แนะนำให้ใช้แปรงในการถ่ายโอนส่วนต่างๆ เพราะมันทำให้เกิดการถ่ายเทของรีเอเจนต์ด้วย อย่างไรก็ตาม อาจใช้แปรงขนละเอียด ซับมันทุกครั้งหลังใช้งาน ไม่ควรใช้เข็มเพราะอาจทำให้ส่วนต่างๆ ทิ่มและทำให้เสียหายได้

3. การคายน้ำได้รับอิทธิพลจากความชื้นในบรรยากาศ ดังนั้นจึงมักจะกลายเป็นเรื่องยากที่จะแยกส่วนการคายน้ำออกในช่วงฤดูฝน ควรปิดพัดลมในระหว่างการย้อมสีเพื่อลดการระเหยของแอลกอฮอล์ระหว่างการย้อมสี

4. ควรวางกระจกนาฬิกาไว้บนกระดาษสีขาวในขณะที่นำส่วนต่างๆ ออกจากรอยเปื้อน พวกเขาสามารถวางได้อย่างง่ายดายบนพื้นหลังสีขาว

5. หากส่วนเปลี่ยนเป็นสีขาวเมื่อถ่ายโอนไปยังไซลอลหรือยาหม่องจากแอลกอฮอล์แน่นอน แสดงว่าขาดน้ำไม่สมบูรณ์ หากการย้อมสีไม่เพียงพอ (มากหรือน้อยกว่านั้น) สามารถทาสีใหม่ได้ ในกรณีดังกล่าวทั้งหมด ควรส่งต่อส่วนต่างๆ ผ่านเกรดแอลกอฮอล์ในลำดับที่ตรงกันข้ามกับที่ปรากฏขึ้น

6. ขณะติดตั้งส่วนต่างๆ ในยาหม่องแคนาดาหรือสื่อการติดตั้งอื่นๆ ควรจุ่มกระจกครอบลงในไซลอลแล้ววางทับส่วนนั้นทีละน้อยโดยใช้เข็ม

ถ้ายาหม่องมีความหนาเกินไป ควรเจือจางด้วยไซลอลเล็กน้อยก่อน โดยปกติยาหม่องจะเป็นกลางและมีสีฟางอ่อน ถ้ายาหม่องมีสีแดงแสดงว่าเป็นกรด ไม่ควรประกอบชิ้นส่วนในยาหม่องที่เป็นกรดเพราะจะทำให้รอยเปื้อนจางลงอย่างรวดเร็ว

7. หลังจากติดตั้งแล้ว ควรเก็บส่วนต่างๆ ไว้บนจานร้อน (37° ถึง 45°C) เป็นเวลาอย่างน้อย 24 ชั่วโมง ช่วยไล่ฟองอากาศและทำให้สไลด์แห้ง

ในวัสดุจากพืชหลายชนิด การรวมเซลล์ต่างๆ เข้าด้วยกันมักรบกวนการย้อมสีและทำให้การเตรียมการย้อมสียากต่อการศึกษา ส่วนดังกล่าวสามารถล้างได้โดยการถ่ายโอนจากแอลกอฮอล์ 50% ไปยังจานน้ำด้วยคีมหรือแปรง

จากนั้นใช้เข็มหรือคีมใส่แก้วนาฬิกาที่มีโซเดียมไฮโปคลอเรต สารฟอกขาวหรือพาราโซน และเก็บไว้ไม่เกิน 5 นาที ทั้งส่วนอาจละลายได้หากปล่อยทิ้งไว้นานพอ ล้างส่วนต่างๆ ให้สะอาดในน้ำหลังจากการฟอกขาว อย่าจุ่มแปรงลงในสารฟอกขาว ขนแปรงจะละลาย

ตารางการย้อมสี:

มีการใช้คราบสองประเภทหลัก:

1. คราบชั่วคราว – ซึ่งสีจะจางลงหรือค่อยๆ ทำลายส่วนต่างๆ และ

2. คราบถาวร – ซึ่งสีจะคงอยู่นานหลายปี

1. คราบชั่วคราว:

ใช้สารละลายน้ำ 1% คราบมักจะผสมกับกลีเซอรีน 10 มล. ของคราบน้ำ 1% จะเพิ่มกลีเซอรีน 50% 90 มล. ส่วนต่าง ๆ ถูกติดตั้งโดยตรงในสื่อนี้ เนื้อเยื่อ Macerated สามารถย้อมด้วยส่วนผสมนี้ได้

หยด macerate ที่ล้างแล้วลงในน้ำผสมกับส่วนผสมหนึ่งหยดบนสไลด์แล้ววางแก้วที่ครอบไว้ ผนังเซลล์ทั้งหมดเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงิน ยกเว้นผนังที่ตัดแล้วซึ่งยังคงไม่มีรอยเปื้อน ความเข้มของสีน้ำเงินขึ้นอยู่กับลักษณะทางเคมีและทางกายภาพของผนังเซลล์ ผนังชั้นต่างๆ มีคราบสกปรกต่างกันไป

NS. สารละลายคลอร์-ซิงค์-ไอโอดีน (สารละลาย Schult’s):

สารละลายนี้ประกอบด้วย — ซิงค์คลอไรด์ 30 ก., โพแทสเซียมไอโอไดด์ 5 ก., ผลึกไอโอดีน 1 ก. และน้ำกลั่น 140 มล. ส่วนต่างๆ ถูกวางบนสไลด์และเพิ่มโซลูชันนี้ 1 หรือ 2 หยด สิ่งนี้จะถูกลบออกหลังจาก 2-4 นาทีและเติมกลีเซอรีน 50% หยด อีกทางหนึ่งคือเพิ่มกลีเซอรีน 50% โดยตรงและติดตั้งส่วนต่างๆ ในส่วนผสม

ผนังเซลลูโลสเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงิน แป้งเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงินดำ ลิกนินและซับเบรินเปลี่ยนเป็นสีเหลือง และผนังที่ปรับสภาพปานกลางจะเปลี่ยนเป็นสีเขียวแกมน้ำเงิน คราบนี้จะทำให้ผนังเซลล์พองตัวและสลายไปในที่สุด จึงต้องตั้งข้อสังเกตทันที

ใช้สารละลายอิ่มตัวของสีย้อมในแอลกอฮอล์ 70% ผนังเซลล์เปลี่ยนเป็นสีดำหรือสีเทา เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการแสดงหลุม

NS. โฟโรกลูซินและคอนซี HCl:

เพิ่มสารละลายน้ำอิ่มตัวของ phloroglucin ลงในส่วนที่ถ่ายบนสไลด์แล้วตามด้วย HCl บางคนชอบที่จะใช้ 20% HCl ลิกนินเปลี่ยนเป็นสีแดง

ย้อมด้วยสารละลายแอลกอฮอล์อิ่มตัวประมาณ 10 นาที แล้วล้างด้วยแอลกอฮอล์อย่างรวดเร็ว ใส่กลีเซอรีน 50% เนื่องจากไขมันละลายได้ในแอลกอฮอล์ ให้เก็บไว้ในแอลกอฮอล์ไม่เกินความจำเป็น Sudan IV เป็นคราบไขมันเฉพาะที่เปลี่ยนเป็นสีส้ม เลซิติน ลาเท็กซ์ แว็กซ์ คิวติน และเรซิน ยังเป็นคราบ คลอโรพลาสต์ถูกย้อมเป็นสีแดงหม่น

NS. ไอโอดีนกับโพแทสเซียมไอโอไดด์:

ใช้สารละลายที่เป็นน้ำของไอโอดีน 1% และโพแทสเซียมไอโอไดด์ 1% ส่วนต่างๆ จะถูกย้อมเป็นเวลาสองสามนาที และสังเกตได้โดยตรงหรือหลังจากติดกลีเซอรีน 50% แล้ว อาจใช้สารละลายไอโอดีน 1% ที่เป็นน้ำได้เช่นกัน แป้งเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงิน เซลลูโลส คราบอินนูลิน โปรตีนและอัลคาลอยด์เปลี่ยนเป็นสีน้ำตาลและเพคติน คิวติน แคลโลสและคอร์กเปลี่ยนเป็นสีเหลือง

บางครั้งใช้สารละลายอีโอซินที่เป็นน้ำ 1% ทำให้เนื้อเยื่อมีสีเหลืองทั่วไป

2. คราบถาวร:

การย้อมสีแบบถาวรจะมาพร้อมกับการคายน้ำและการล้างโดยสมบูรณ์ ตามด้วยการติดตั้งในยาหม่องแคนาดาหรือยูปารัล ฯลฯ (สำหรับรายละเอียด โปรดดูที่ส่วน Cytology)

ขึ้นอยู่กับจำนวนคราบที่ใช้เรียกว่า:

โดยทั่วไปแล้ว การย้อมสีเพียงครั้งเดียวจะทำได้ในกรณีของ thallophytes และ bryophytes ซึ่งไม่มีเนื้อเยื่อที่เป็น lignified และวัสดุผนังเซลล์ส่วนใหญ่เป็นเซลลูโลส:

I. Heidenhain ของเหล็ก Hematoxylin:

1. ถ่ายโอนส่วนจากน้ำไปเป็น mordant (สารมอร์แดนท์คือสารใดๆ ที่รวมและปรับสีย้อมในวัสดุที่ไม่สามารถย้อมได้โดยตรง) ที่มีธาตุเหล็ก อะลูมิเนียม หรือทองแดง เนื่องจากฮีมาทอกซิลินไม่สามารถย้อมเนื้อเยื่อได้หากปราศจากการย้อมด้วยสารตัวใดตัวหนึ่ง โลหะทั้งสามนี้

โดยปกติจะใช้เฟอร์ริกแอมโมเนียมซัลเฟต (สารส้มเหล็ก) ความแข็งแรงของสารละลายมักจะอยู่ที่ 3% แต่จะแตกต่างกันไปตั้งแต่ 2% ถึง 4% ของสารละลายที่อ่อนกว่าซึ่งเหมาะสำหรับเนื้อเยื่อที่อ่อนกว่า เช่น สาหร่าย ควรเตรียมสารละลายให้สดใหม่ก่อนใช้งาน

ส่วนผสมสำหรับมอร์แดนท์แบบถาวรสามารถเตรียมได้โดยการผสม 500 มล. น้ำกลั่น 5 มล. กรดอะซิติกน้ำแข็ง 0.6 มล. ซี.พี. กรดซัลฟิวริกและผลึกสารส้มสีม่วงใส 15 กรัม เวลาที่ใช้ในการ mordanting ไม่ควรเกิน 2 ชั่วโมง และสำหรับส่วนที่บาง 1 ชั่วโมงก็เพียงพอแล้ว

2. ล้างให้สะอาดในน้ำไหลเป็นเวลา 5 นาทีแล้วล้างออกด้วยน้ำกลั่นเพื่อขจัดเกลือที่มีอยู่ในน้ำประปาซึ่งขัดขวางการย้อมสี

3. ย้อมในสารละลายเฮมาทอกซิลิน 0.5% ที่เป็นน้ำของไฮเดนไฮน์ ตามกฎแล้ว ส่วนต่าง ๆ จะถูกทิ้งไว้ในคราบอย่างน้อยตราบเท่าที่พวกเขายังคงอยู่ในคราบเปื้อน แต่ในกรณีส่วนใหญ่ 24 ชั่วโมงเป็นเวลาที่เหมาะสมที่สุด

4. ล้างคราบส่วนเกินด้วยน้ำ

5. กำจัดเฟอริกแอมโมเนียมซัลเฟต 2% (หรือเฟอริกคลอไรด์) เวลาที่ใช้ในการขจัดคราบจะแตกต่างกันไปตามลักษณะของวัสดุ ความหนาของส่วนต่างๆ ฯลฯ แยกความแตกต่างภายใต้กล้องจุลทรรศน์ เมื่อส่วนต่างๆ ปรากฏเป็นสีเทาดำ แสดงว่าการย้อมสีเสร็จสิ้นแล้ว

6. ล้างในน้ำไหลเป็นเวลา 30 นาทีถึง 1 ชั่วโมงเพื่อขจัดคราบคราบสกปรกออกให้หมด ซึ่งหากปล่อยทิ้งไว้จะค่อยๆ จางลง

7. คายน้ำในแอลกอฮอล์ 50%, 70% และ 95% โดยเก็บไว้อย่างน้อย 5 นาที ให้การเปลี่ยนแปลงแอลกอฮอล์สัมบูรณ์สองครั้งที่ช่วงเวลา 5 นาที’

8. เก็บไว้ในส่วนผสมของแอลกอฮอล์-ไซเลมแน่นอน (1: 1) เป็นเวลา 5 นาที

9. Give two changes in xylol at 5 minutes’ interval.

10. Mount in Canada balsam and dry on a hot plate.

Although hematoxylin staining is rather cumbersome, the result is well worth it as different cellular components, including chromatin matter, take up various shades of stain.

ครั้งที่สอง Bismarck Brown Staining:

This is a suitable stain for soft and non-lignified plant tissues such as bryophytes and thallophytes.

1. Take the sections from water and pass through 30% and 50% alcohol keeping 5 minutes in each. 30% alcohol may as well be omitted.

2. Stain the sections in Bismarck brown (1% solution in 70% ethanol) for 5 to 15 minutes. The duration of staining depends upon the concentration of the stain and the thickness of sections. If the stain appears to be relatively more concentrated, it may be diluted with a few drops of 70% alcohol. If the sections are rather thick, stain for a shorter period so that the stain remains light.

3. Pass through 80% (or 90%) and 95% alcohol keeping 5 minutes in each. Give two changes in absolute ethyl alcohol keeping at least 5 minutes in each.

4. Clear in xylol, preferably giving 2 changes of at least 5 minutes’ duration.

5. Mount in Canada balsam, Euparol or DPX mountant. All cell walls turn brown.

สาม. Light Green Staining:

Single staining can also be done using light green instead of Bismarck brown. Staining is done after dehydration in 90% alcohol as light green is dissolved in 95% alcohol (1% solution in 95% alcohol). The rest of the staining schedule is the same as in Bismarck brown staining.

IV. Ehrlieh’s Hematoxylin Staining:

1. Keep the sections in 30% alcohol for 5 minutes.

2. Stain in matured Ehrlieh’s hematoxylin solution for 5 to 30 minutes.

3. Wash out excess stain with 50% alcohol.

4. Dehydrate, clear and mount in Canada balsam.

This is an excellent stain for algae, fungi and small bryophytes.

Double staining is resorted to in case of all sections having both lignified and non-lignified tissues, i.e., in case of pteridophytes, gymnosperms and angiosperms. One of the two stains is specific for lignified tissues and the other stains the non-lignified tissues, i.e., mainly cellulose. The sections with two different stains show more contrast. There are numerous double staining schedules.

Some of these, which are usually followed in the class, are discussed:

I. Safranin and Delafield’s Hematoxylin Staining:

1. Freshly mix safranin (1% in 50% alcohol) and matured Delafield’s hematoxylin in the proportion of 1: 4. Filter the mixture. This stock mixture can be used up to a week, but should be filtered each time before use.

2. Stain the sections in this mixture for 2 to 6 hours. Some sections need less time. If it is more convenient to stain overnight, use safranin-hematoxylin mixture in the proportion of 94: 6.

3. Transfer the sections to 50% alcohol containing 2 to 3 drops of conc. HCl. This solution removes the stain, acting first on safranin. The duration of de-staining has to be learnt by experience. Generally, sections should be removed when they still appear slightly dark or over-stained under microscope.

4. Transfer the sections to 95% alcohol and keep for 5 minutes. This is followed by 5 minutes in absolute alcohol.

5. Keep the sections in alcohol-xylol mixture (1: 1) for 5 minutes.

6. Transfer to xylol and keep for 10 minutes.

7. Mount in Canada balsam and dry on a hot plate.

Lignin turns red, cellulose turns dark blue and cellulose walls with some lignin become purple.

ครั้งที่สอง Safranin and Fast Green Staining:

1. Keep the sections in 30% alcohol for 5 minutes.

2. Stain in a 1% solution of safranin in methyl cello solve 50% alcohol for 2 to 24 hours, or even 48 hours (Prepare safranin solution by dissolving 4 g of safranin in 100 ml each of 95% alcohol and distilled water followed by 4 g of sodium acetate and 8 ml of formalin. The acetate intensifies the stain and formalin acts as a mordant.).

3. Wash off the excess stain with running water for a few moments.

4. Differentiate and dehydrate with 95% alcohol to which 0.5% picric acid has been added. Ordi­narily, about 10 seconds of treatment is sufficient for differentiation.

5. Stop action of the acid by immersing the slide in 95% alcohol to which 4 to 5 drops of ammonia per 100 ml of alcohol has been added. This treatment should not be continued for more than 2 minutes, as alcohol extracts stain.

6. Dehydrate in absolute alcohol for 10 seconds.

7. Counterstain in fast green for not more than 15 seconds (Prepare a nearly saturated solution of fast green in equal parts of methyl cello solve and absolute alcohol and 75 parts clove oil.). This stain can be used repeatedly.

8. Pour the fast green stain back into dropping bottle and rinse off the excess stain with clove oil. Used clove oil may be used.

9. Clear in a mixture of 50 parts clove oil, 25 parts absolute alcohol and 25 parts xylol — for a few seconds (Actually this reagent mixture, after use, is collected in a bottle and used in step 8.).

10. Remove the clearing mixture by treating for a few seconds in xylol (Add 3 to 4 drops of absolute alcohol to this xylol to take care of any moisture that may be inadvertently brought over.).

11. Give two changes in pure xylol for at least 10 minutes’ interval and then mount in Canada balsam.

The safranin appears a brilliant red in chromosomes, nuclei and ii> lignified and cutinized cell walls while the fast green gives a bright green colour to cellulose cell walls and cytoplasm. Both the colours are permanent and they persist for many years.

สาม. Safranin and Light Green Staining:

1. Keep the sections in 30% alcohol for 5 minutes.

2. Stain the sections in 1% solution of safranin in 50% alcohol for 30 minutes. The exact duration of staining depends upon the intensity of the dye solution. Some anatomists (Johansen etc.) prefer to make a 1% solution of the dye in 95% alcohol. A part of this stock solution is diluted with an equal volume of distilled water when needed for use. If this proves to be a strong solution, it may be further diluted with 50% alcohol.

3. Dehydrate in 70%, 80% and 90% alcohol, keeping 5 minutes in each.

4. Counterstain in 1% light green in 95% alcohol, for 15 seconds to 1 minute. The exact duration of staining is to be determined by experience. It depends on the intensity of the dye solution. If required, the staining solution may be further diluted by adding more 95% alcohol.

5. Dehydrate in absolute alcohol for 5 minutes.

6. Pass through alcohol xylol (1: 1) mixture keeping the sections in it for 5 minutes.

7. Clear in xylol for at least 10 minutes.

8. Mount in Canada balsam and dry on a hot plate.

Lignified walls turn red and cellulose walls green. Often the entire section turns green indicating over-staining in light green and under-staining in safranin. In such cases, the duration of safranin staining should be increased, while reducing the duration of light green staining.

The light green solution may also be further diluted. Sometimes, both the stains appear to be rather fade. To counteract this, the duration of treatment in different alcohol grades should be reduced. Although both the stains are permanent, light green appears to fade rather quickly.


ผลลัพธ์และการอภิปราย

We have described a simple, rapid, safe, and widely effective method to prepare extended DNA fibers in plants from isolated nuclei by directly chopping fresh leaves in isolation buffer. The present method for preparation of plant DNA fiber was based on liquid nitrogen grinding of leaves ( 15 ). Because the degree of grinding is very difficult to control, over- or under-grinding of leaves occurs frequently and often no DNA fibers of desired quality can be obtained with the liquid nitrogen method. The key step of our new method is that the routine procedure of grinding leaves in liquid nitrogen is replaced by chopping of leaves with a blade in ice-cold nucleus isolation buffer. In comparison with nitrogen grinding-based methods, the chopping method established in this study is much easier to control, releasing nuclei from cells in the nucleus isolation buffer is easier with chopping, and fewer nuclei are destroyed. The probability of success in isolating nuclei for DNA fiber preparations is almost 100% for the plant species tested with this new method. The nuclei of the tested maize and the DNA fibers of the tested maize, wild rice, and barley are shown in Figure 1A–D. Isolation of the nucleus takes 3 h with a routine method in contrast, our new method is very simple and rapid and takes only 20 min for the entire process from leaf chopping to extension of DNA fibers. This procedure is also safe because nonpoisonous dithiothreitol is used. The successful and reliable preparation of maize, wild rice, and barley DNA fibers suggests that this new method should be readily applicable for other plant species.

NS: Nuclei of maize prepared with the chopping method and stained with propidium iodide (0.2 mg/ml) before examination under a microscope. NS: The extended maize DNA fibers prepared from nuclei shown in A and stained with propidium iodide (0.2 mg/ml). ค: Wild rice DNA fibers. NS: Barley DNA fibers. E: Maize DNA fibers hybridized with 45SrDNA probes labeled by biotin. F: Two 600-μm-long signals correspond to approximately 1.96 Mb from maize genomic DNA probes labeled by biotin. G: Maize DNA fibers hybridized with maize genomic DNA probes labeled by biotin. Scale bars = 30 μm in B–D and G, 40 μm in E and F.

To examine the effects of centrifuge time on the amount and quality of nuclei recovered, we tested different centrifuge times of 20 s, 30 s, 40 s, and longer times at a high speed (16,000NS) by flow cytometry after chopping. The result demonstrated that most of the nuclei remained intact during isolation (Fig. 1A), and more than 20,000 nuclei per gram of leaves were obtained at 16,000NS for 40 s, with less debris. Although more nuclei could be obtained at longer centrifuge times, there would be more debris (data from flow cytometric analysis not shown). Isolated nuclei from all tested plants were found to be very suitable for preparation of DNA fibers (Fig. 1B–D). DNA fibers prepared from maize, wild rice, and barley nuclei isolated with the chopping method were stained with PI and showed a stretched pattern of long and thin parallel threads (Fig. 1B–D) that spanned fiber lengths of about 2 Mbp and exhibited sufficient quality suitable for FISH mapping analysis.

Tracing single DNA fibers can be difficult by staining with PI or 4,6-diamidino-2-phenylindole therefore, to examine the integrity and length of single extended DNA fibers and their suitability for hybridization, DNA fiber preparations are hybridized with large DNA sequences such as genomic DNA and 45S rDNA as probes. In the single extended DNA fiber preparation, the signals were observed as fluorescent strings (Fig. 1E–G). In human genome research, DNA fragments as long as 2.6 Mb could be measured by fiber-FISH ( 5 ) in maize, DNA loci longer than 2.8 Mb could be measured by fiber-FISH ( 16 ). The longest signal obtained with maize genomic DNA as probes was about 600 μm. Assuming a stretching degree of approximately 3.27 kb/μm ( 6 ), we can define a DNA fragment of approximately 1.96 Mb with these DNA fiber preparations. As a consequence, the extended DNA fibers generated with this new method can be used to map and analyze many large repeated sequences and genomic DNA clones including BAC and YAC clones. Fiber-FISH results with 45S rDNA as a probe showed an average signal size of 491.67 ± 60.05 μm (measure number, n = 12), so we estimated the size of the 45SrDNA to be approximately 1.66 Mb in maize genome.


ดูวิดีโอ: การคำนวณกลองจลทรรศน (สิงหาคม 2022).